激發光打在被測物質上，被測物質中的分子、原子吸收激發光的能量后，從低能級躍遷到高能級。該高能級是不穩定的，經過一段時間后，分子、原子自發的從非穩態的高能級躍遷到穩態或亞穩態的較低能級，同時發出一個光子。不同的原子、分子的能級是固定的，因此它們發出的光子能量是一定的，即波長一定。我們只要測出該熒光的波長，即可以識別所測物質的元素和成份，而比較熒光強度，
熒光光譜儀可以測出它的含量。那我們如何區別激光和熒光呢？
熒光往往很弱，如果不把它從激發光里分離出來，它會被激發光*淹沒。熒光光譜儀通常用以下一種或幾種方法來分離熒光：
1、90°布置法：激發光和探測器90°方向布置。由于熒光沒有方向性，它向四周發射，因此可以把探測器放在與激發光成90°的位置來接收熒光。大部分的熒光測量裝置都采用此方法（同時常常配上其它方法）。
2、時間延遲法：由產生熒光的原理可知，熒光從產生到*消失，它有一個時間過程（即從高能級的非穩態躍遷到低能級的亞穩態或穩態的時間）。不同的物質，這個時間的長短是不一樣的，它們從幾微秒到幾分鐘不等。我們可以給探測器的快門一個延遲時間，讓激發光*消失后開始對熒光采樣。在一些特殊條件，如用反射探針測固體、液體的熒光時，光路無法90°布置，這時需要通過延遲采樣時間來分離出熒光。
3、濾波法：從熒光產生原理可知，熒光的波長大于激發光的波長。我們在探測器前面放一個長通濾波片，它的截至波長稍大于激發光波長。這樣，只有熒光才能被探測器采集。該法的另一個好處是可以濾掉一部分雜散光，但是它也可能濾掉一部分熒光。
熒光光譜儀
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